Общие подходы к центрифугированию в лаборатории
2 марта 2023
Центрифугирование клеток является обязательным этапом в обычных клеточных экспериментах. Это не только позволяет прилипшим образцам полностью осесть на дно пробирки, но также помогает подтвердить концентрацию клеток. Отцентрифугированные образцы можно использовать для последующих экспериментов.
В зависимости от типа клеток и органелл следует применять различные подходы к центробежному разделению.
Итак, каковы общие подходы к центрифугированию клеток?
01 Дифференциальное центрифугирование
Дифференциальное центрифугирование разделяет частицы разных размеров и форм в гетерогенной смеси в зависимости от скорости оседания частиц при постепенном увеличении центробежной силы. Обычно он используется для разделения лабораторных образцов, таких как митохондрии органелл, хлоропласты, белки и вирусы.
Шаги разделения
Шаг 1: Установите относительно более низкую скорость, чтобы позволить частицам высокой плотности осесть на дно пробирки, в то время как частицы среднего и малого размера в смеси все еще находятся во взвешенном состоянии в надосадочной жидкости.
Шаг 2: Соберите осадок. Полученный супернатант со стадии 1 можно центрифугировать с более высокой скоростью для отделения частиц относительно среднего или малого размера и так далее.
02 Центрифугирование в градиенте плотности
Центрифугирование в градиенте плотности, также известное как зональное центрифугирование, включает зональное центрифугирование по скорости и центрифугирование с изоплотностью.В зависимости от типа клеток и органелл следует применять различные подходы к центробежному разделению.
Итак, каковы общие подходы к центрифугированию клеток?
01 Дифференциальное центрифугирование
Дифференциальное центрифугирование разделяет частицы разных размеров и форм в гетерогенной смеси в зависимости от скорости оседания частиц при постепенном увеличении центробежной силы. Обычно он используется для разделения лабораторных образцов, таких как митохондрии органелл, хлоропласты, белки и вирусы.
Шаги разделения
Шаг 1: Установите относительно более низкую скорость, чтобы позволить частицам высокой плотности осесть на дно пробирки, в то время как частицы среднего и малого размера в смеси все еще находятся во взвешенном состоянии в надосадочной жидкости.
Шаг 2: Соберите осадок. Полученный супернатант со стадии 1 можно центрифугировать с более высокой скоростью для отделения частиц относительно среднего или малого размера и так далее.
02 Центрифугирование в градиенте плотности
1. Зональное центрифугирование.
Зональное центрифугирование обычно используется для разделения клеток или органелл с одинаковой плотностью, но разными размерами. Сначала загрузите в центрифужную пробирку среду с градиентом плотности, такую как сахароза, глицерин, CsCl и Percoll. Стоит отметить, что плотность частиц образца должна быть выше, чем плотность любой точки градиентного столба жидкости. Поскольку отделенные частицы имеют разные скорости осаждения в градиентной жидкости, разные компоненты в смешанном образце могут образовывать свои зоны в разных положениях столба градиентной жидкости, поэтому разделение реализуется во время центрифугирования.
2. Центрифугирование по изоплотности
Изоплотностное центрифугирование применяется для разделения частиц с различной плотностью. При достаточной центробежной силе и времени клетки или органеллы могут оседать или плавать в среде с той же плотностью в среде с непрерывным градиентом. Разделение достигается по мере того, как клетки остаются и достигают равновесия. Перколл широко используется в качестве среды, в то время как CsCl, Cs2SO4 и трийодоформил-глюкозамин также могут достигать стабильного градиента после длительного центрифугирования.
