Методика определения нуклеиновой кислоты с помощью набора DLAB
Пипетка: используется для подготовки реактивов для выделения нуклеиновой кислоты и подготовки набора для ПЦР-теста.
Сухая баня/инкубатор: HB120-S / HM100-Pro используется для инактивации образца при 56 °С.
Микроцентрифуга, вихревая мешалка и высокоскоростная центрифуга D2012 plus: используются при приготовлении реагентов и выделении нуклеиновой кислоты.
Например, существуют два способа выделения нуклеиновой кислоты: вручную и автоматически. Здесь приводятся указания по подготовке наборов ПЦР перед ПЦР-анализом в режиме реального времени после выделения нуклеиновой кислоты вручную с использованием колонок.
1. Внесите 10 мкл протеазы К и 6 мкл РНК-носителя в стерильную пробирку для центрифугирования объемом 1,5 мл, затем добавьте 200 мкл образца и 200 мкл лизирующего буфера, смешайте их с помощью вихревой мешалки MX-S/MX-E в течение 15 секунд, затем выполните кратковременное центрифугирование центрифугой D1008 или D2012 plus и выдержите пробирку при комнатной температуре в течение 5 минут.
2. Добавьте 400 мкл безводного этанола и в течение 15 секунд перемешивайте с помощью вихревой мешалки MX-S/MX-E в закрытой пробирке. Непосредственно после перемешивания выполните центрифугирование с помощью центрифуги D1008, выдержите пробирку при комнатной температуре в течение 5 минут.
3. Перенесите всю смешанную жидкость в спин-колонку, поместите спин-колонку в пробирку-сборник. Закройте пробирку и с помощью центрифуги D2012 PLUS выполните ее центрифугирование при 12000 об/мин в течение 1 минуты, поместите спин-колонку в новую пробирку-сборник.
4. Внесите в спин-колонку 500 мкл промывочного буфера (Washing Buffer), закройте ее и с помощью центрифуги D2012 PLUS выполните центрифугирование при 12000 об/мин в течение 30 секунд, поместите спин-колонку в новую пробирку-сборник.
5. Внесите в спин-колонку 500 мкл промывочного буфера (Rinsing Buffer), закройте пробирку и с помощью центрифуги D2012 PLUS выполните центрифугирование при 12000 об/мин в течение 30 секунд, поместите спин-колонку в новую пробирку-сборник.
6. После центрифугирования с помощью центрифуги D2012 PLUS при 12000 об/мин в течение 3 минут для удаления остатков промывочного буфера поместите спин-колонку в новую центрифужную пробирку, не содержащую РНКаз (1,5 мл), затем осторожно откройте спин-колонку и просушите ее в течение 3 минут при комнатной температуре.
7. Добавьте 100 мкл элюента в центр спин-колонки, закройте и выдержите ее при комнатной температуре в течение 3 минут. Выполните центрифугирование при 12000 об/мин в течение 1 минуты для сбора элюента.
8. Вирусную нуклеиновую кислоту, полученную при центрифугировании, можно использовать для ПЦР-анализа или хранить при температуре от -70 до -90 °С.