Пипетирование неводных жидкостей

Пипетирование неводных жидкостей, таких как глицерин, ДМСО, этанол или Tween® 20, может создавать серьезные проблемы по нескольким причинам. Калибровка микропипеток с вытеснением воздухом выполняется в контролируемой среде с водой, и дозирование неводных жидкостей может повлиять на точность результатов. Поэтому для достижения наилучших результатов вам необходимо использовать правильную технику дозирования.

Некоторые общие рекомендации действительны для всех задач дозирования:

• Держите микропипетку максимально вертикально на каждом этапе дозирования.
• Не погружайте наконечник пипетки слишком глубоко в резервуар для образца, чтобы снизить риск уноса образца.
• Отрегулируйте скорость дозирования в соответствии с жидкостью.
• Если вам требуется более подробная информация о передовых методах дозирования, здесь представлен общий обзор.

Пипетирование обычных неводных жидкостей

Так что же можно сделать? В случаях, когда пипетируется только один тип неводного раствора, можно откалибровать пипетку для этой жидкости, чтобы улучшить результаты. Однако опыт и техника пользователя, в том числе его субъективное впечатление о скорости ручного дозирования, могут значительно повлиять на дозирование этих жидкостей и часто недооцениваются. В INTEGRA, самые распространенные неводные растворы были протестированы с помощью пипеток, произведенных данной компанией. Ниже вы найдете объяснение проблем, связанных с жидкостью, рекомендации по их устранению и оптимальные настройки для электронных дозаторов. Использование этих рекомендаций должно позволить вам быстрее настроить микропипетку и получить наилучшие результаты с меньшим количеством тестов (хотя для определенных рабочих процессов может потребоваться дальнейшая оптимизация).

Как дозировать вязкие жидкости

ДМСО

Диметилсульфоксид (ДМСО) обычно используется в качестве криопротектора в культуре клеток или для предотвращения образования вторичных структур в матрицах ДНК или праймерах во время ПЦР. Следующие рекомендации могут повысить точность дозирования вязкого ДМСО с использованием пипеток VIAFLO: Используйте насадки с низким удерживанием - вязкие жидкости прилипают к стенкам насадки, что затрудняет вытеснение всего объема жидкости. Используйте обратное пипетирование, так как вязкие жидкости могут затруднить полное опорожнение наконечника. Наберите больше жидкости, чем нужно, налейте желаемое количество и слейте остаток. Держите наконечник в растворе дольше - подождите 2-3 секунды после аспирации и дозирования, так как небольшое отверстие наконечника пипетки и эластичность воздушного столба могут помешать пипетированию вязких образцов в противном случае Отрегулируйте скорость - используйте скорость дозирования ~ 450 мкл / сек (скорость 6 для электронных пипеток VIAFLO на 50–1250 мкл) или меньше для более высоких концентраций ДМСО. Для более низких концентраций ДМСО можно использовать более высокие скорости дозирования.

Глицерин

Глицерин обычно используется в качестве криопротектора в культуре клеток или в качестве источника углерода в периодических ферментациях с подпиткой микробов. Следующие рекомендации могут улучшить качество дозирования вязкого глицерина с помощью пипеток VIAFLO: Используйте наконечники с широким отверстием - особенно для 80% глицерина, так как это облегчит попадание жидкости в наконечник. Используйте обратное дозирование - так как при обычных методах дозирования может быть трудно полностью опорожнить наконечник из-за прилипания жидкости к стенке наконечника. Держите наконечник в растворе дольше - подождите 2-3 секунды после аспирации и дозирования, так как небольшое отверстие наконечника пипетки и эластичность воздушного столба могут помешать пипетированию вязких образцов в противном случае Отрегулируйте скорость - используйте скорость дозирования ~ 300 мкл / сек (скорость 4 для электронных дозаторов VIAFLO объемом 50–1250 мкл). Низкие концентрации глицерина менее вязкие, и их можно пипетировать с более высокой скоростью.

Твин 20

Твин 20 является обычным моющим средством для иммуноанализов, поскольку он предотвращает неспецифическое связывание антител. Следующие рекомендации могут улучшить результаты дозирования вязкого и пенящегося Твин 20 с использованием пипеток VIAFLO: Используйте наконечники с широким отверстием - так жидкость будет легче попадать в наконечник. Используйте обратное пипетирование - чтобы снизить риск попадания воздуха во время выдувания в образец, что может привести к дальнейшему пенообразованию. Отрегулируйте скорость - используйте скорость дозирования ~ 100 мкл / сек (скорость 2 для электронных дозаторов VIAFLO объемом 50-1250 мкл)

Как дозировать летучие жидкости

Спирт этиловый

Этанол используется для широкого спектра применений, в том числе для иммобилизации микробов, в качестве источника углерода, а также в качестве дезинфицирующего средства, растворителя или осадителя ДНК и РНК. Следующие рекомендации могут повысить точность дозирования летучего этанола с помощью пипеток VIAFLO: 

• Предварительно смочите наконечники этанолом - выполнив 2-3 аспирации / дозирования полного объема пипетки. Это гарантирует, что среда внутри наконечника пипетки насыщается парами этанола, уменьшая испарение целевой жидкости. Для дозаторов VIAFLO идеально подходит режим «Pipet / Mix», и вы можете установить его в качестве первого шага дозирования для ваших пользовательских программ.
• Используйте обратное пипетирование - чтобы еще больше снизить эффект испарения, так как любые потери будут связаны с выбросом после дозирования, а не с распределенным объемом.
• Отрегулируйте скорость. Используйте скорость дозирования ~ 1100 мкл / сек (скорость 10 для электронных дозаторов VIAFLO объемом 50–1250 мкл). Этанол с более низкой концентрацией менее летуч и может быть внесен в пипетку с более низкой скоростью.

Выводы

Вязкие и летучие жидкости могут быть проблематичными для дозирования. Знание образца позволяет оптимизировать настройки дозатора в соответствии с потребностями каждой жидкости, обеспечивая высочайшую точность и воспроизводимость результатов. Эти четыре примера разработаны, чтобы дать вам представление о наилучших настройках для ряда неводных растворов, и их можно применять и настраивать для других жидкостей с аналогичными свойствами или пипеток с различными диапазонами объема.